高效液相色谱天然产物成分键合硅胶固定相研究进展

近年来,高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)因其高效、快速、灵敏等特征,广泛应用于生命科学、食品药品分析等领域。但目前色谱配体主要来源于化学合成,结构复杂且常伴有高度毒性,难以满足绿色产品纯化需求。天然产物成分作为绿色低毒、来源广泛的色谱配体显现出其独特优势。本文对近年来高效液相色谱天然产物成分键合硅胶固定相的研究进展进行了综述,主要介绍了中草药药用成分、糖类、氨基酸类、大环抗生素类、环糊精类等天然产物成分键合硅胶固定相的制备、色谱性能和保留机制。以C18(octadecylsilyl-bonded silica,ODS)色谱柱为参照,探讨了新型固定相在分离富集天然产物和实际复杂样品中的优良选择性和应用价值,并对我国的天然产物成分键合硅胶固定相的研究和应用前景进行了展望。     

实时荧光定量PCR法评价甘薯蛋白对结直肠癌移植瘤荷瘤鼠肿瘤相关因子的影响

目的 利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)法评价甘薯蛋白(sweet potato protein, SPP)对结直肠癌移植瘤荷瘤鼠肿瘤相关因子的调控作用。方法 12只雄性Babl/c裸鼠腹腔接种人结直肠癌LOVO细胞后经灌胃给予SPP干预21 d, 通过qPCR和免疫组化技术检测肿瘤组织中胰岛素样生长因子1受体(insulin like growth factor 1, IGF1R)、环氧酶2(cyclo-oxygen-ase 2, COX2)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A, VEGFA)、β链蛋白(β-catenin)的表达和分泌情况。结果 所有裸鼠均成瘤, SPP干预后, 肿瘤总重量及个数略减少, HE染色显示, 蛋白干预后肿瘤组织内小血管数量减少, 纤维组织增加。免疫组化检测显示, SPP干预后, IGF1R、COX2、VEGFA、β-catenin表达量均显著减少。qPCR检测显示, 与模型组相比,低剂量SPP干预后, VEGFA mRNA的相对表达量显著降低, 中、高剂量SPP干预后IGF1R、COX2、VEGFA、beta-catenin mRNA的相对表达量均显著降低。结论 SPP具有下调结直肠癌细胞移植瘤荷瘤鼠肿瘤中IGF1R、COX2、VEGFA、β-catenin表达和分泌的作用。     

耐酸性α-淀粉酶产生菌株的筛选及其液态发酵条件研究

从富含淀粉质的土壤中筛选到1株耐酸性α-淀粉酶的产生菌株ZY8,经初步鉴定为黑曲霉。并对其液态发酵条件进行了研究,产酶适宜培养基为可溶性淀粉50g/L,柠檬酸氢二铵20g/L,KH2PO43g/L,CaCl20.1g/LF,eSO4.7H2O0.01g/L,MgSO4.7H2O1g/L。以2%的接种量在30℃、120r/min、初始pH4.0的条件下培养72h,酶活力达到19.86U/mL。酶学特性研究表明,该耐酸性-α淀粉酶最适反应温度为70℃,最适反应pH值为2.0～5.0,在90℃高温处理20min酶活力仍然保持在80%以上。     

多方合同型 IPD 模式 AIA 合同文本研究

IPD 模式按照集成程度从低到高分为过渡型、多方合同型和单一实体型（SPE 型）,相对而言多方合同型 IPD 模式应用较广。美国建筑师协会（AIA）颁布的 C191 合同属于多方合同型 IPD 模式标准合同文本,是 IPD 模式规范化应用的基础,可以作为 IPD 模式在中国应用的重要参考。通过系统梳理多方合同型 IPD 模式的合同结构,对合同文本进行深入挖掘,整理归纳业主、设计单位、承包商在项目各阶段的工作内容,对激励报酬、风险分配和争议处理等具体合同条款进行分析,为中国情景下采用多方合同型 IPD 模式提供借鉴。     

合金化元素Nb对4J36性能的影响

利用Factsage对4J36返回料进行Nb合金化辅助设计,经合金化真空熔炼、锻打及热处理后制备合金试样,通过化学成分分析、X射线衍射(XRD)、光学显微镜(OM)、扫描电子显微镜(SEM)、显微硬度以及膨胀系数测定等检测方法,研究了合金化元素Nb对4J36性能的影响。结果表明,当元素Nb添加质量分数分别为0.5%、1.0%时,显微组织为面心立方的奥氏体结构,出现的孪晶和亚晶结构对晶粒有明显的细化作用,在膨胀系数仍较低的情况下,显微硬度分别提高了25.2%和36%。     

交联度对麦芽糊精性质影响的研究

以交联淀粉为原料通过酶解制备不同交联度麦芽糊精,并对不同交联度麦芽糊精的理化性质进行研究。结果表明,经过交联改性后的麦芽糊精的乳化性并未提高;透明度随着交联度的增加而降低;冻融稳定性随交联度增加而变差。     

芽胞漆酶的固定化方法对比研究与载体选择

为了找到适合芽胞漆酶固定化的载体和方法,对12种载体共19种芽胞漆酶固定化方案进行了对比研究,并通过参考固定化芽胞漆酶的酶活力回收率、重复利用率、成本等因素,选定以DEAE-纤维素为载体通过离子结合法固定为最佳方案。结果表明,包埋法固定化芽胞漆酶存在严重的扩散限制作用,部分包埋法制备的微球还会伴有溶解、膨胀的现象。而多孔材料常因孔径过小难以固定芽胞。芽胞以碳二亚胺为交联剂与载体进行共价结合,具有良好的固定化性能,可作为备选方案。     

多酶偶联催化制备手性化合物（S）-环氧苯乙烷

在水/有机两相中将羰基还原酶SyS1、葡萄糖1-脱氢酶SyGDH和卤代醇脱卤酶CSyHheC偶联催化α-溴代苯乙酮以高效制备(S)-环氧苯乙烷(SO)。第1步反应催化α-溴代苯乙酮不对称还原为(S)-2-溴-1-苯基乙醇((S)-BPE)及NADPH的原位再生,其优化的反应条件:100 mmol/L磷酸钾缓冲液(p H 8.0)/正己烷(V∶V=4∶6)、40 mmol/Lα-溴代苯乙酮、80 mmol/LD-葡萄糖、0.2 mmol/L NADP+和70 mg/m L E.coli/Sygdh-Sys1湿菌体(共表达SyGDH和SyS1),终体积1.0 m L,35℃反应8 h。第2步反应催化(S)-BPE脱卤闭环为(S)-SO,其反应条件:在上述反应体系中加入磷酸钾缓冲液(p H 8.0)和0.3 U SyHheC,终体积2.0 m L,35℃反应30 min。通过连续2步酶催化反应,终产物(S)-SO的摩尔产率为99%、对映体过量值99%。     

一株产蛋白酶不动杆菌的分离与酶学性质

以脱脂奶粉或羊毛粉为唯一碳氮源,从环境样品中筛选蛋白酶产生菌,首次获得一株高产蛋白酶的醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)E9,初步发酵优化显示,该菌株的最适发酵产酶温度35℃,培养基初始p H 6.0,接种量为质量分数4%,培养时间30 h;发酵培养基:蔗糖10 g/L,牛肉膏15 g/L,K_2HPO_4·3H_2O 7 g/L,KH_2PO_4 3 g/L,MgCl_2·6H_2O 1 g/L。酶学性质初步研究表明,不动杆菌E9所产的蛋白酶属于中性蛋白酶,最适作用温度50℃,最适pH 8.0,在p H5.0~8.0及40℃以下时具有良好的稳定性,酶反应动力学参数Km为7.067 mg/m L,Vmax为966.7μg/(m L·min)。     

具有转糖苷活性β-半乳糖苷酶菌株的筛选鉴定

为了获得具有较高酶活力的β-半乳糖苷酶,以乳糖为诱导剂,采用涂有x-gal的鉴别平板分离初筛得到28株生长较好的产β-半乳糖苷酶的菌株。通过摇瓶复筛测定其水解酶活,从中筛选出4株酶活力较高的菌株,并利用高效液相检测菌株的转糖基活性,确定了一株具有转糖苷活性菌株B5582Y,其初始水解酶活可达12 U/m L。根据细胞形态、生理生化数据、16S r DNA序列和rpo B功能基因序列数据多项鉴定分析,最终确定该菌B5582Y为克雷伯氏菌(Klebsiella michiganensis)。